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蜡样芽孢杆菌LJ01中亚硝酸盐还原酶的基因克隆和生物信息学分析

Gene Cloning and Bioinformatics Analysis of Nitrite Reductase from Bacillus cereus LJ01

作     者:胡金双 黄燕燕 陈思敏 邝嘉华 赵珊 彭鑫 刘冬梅 HU Jin-shuang;HUANG Yan-yan;CHEN Si-min;KUANG Jia-hua;ZHAO Shan;PENG Xin;LIU Dong-mei;School of Food Science and Engineering,South China University of Technology

作者机构:华南理工大学食品科学与工程学院 

出 版 物:《CEX [reports]: civil effects exercise. U.S. Atomic Energy Commission》 (Science and Technology of Food Industry)

年 卷 期:2020年第41卷第6期

页      面:94-98页

学科分类:07[理学] 0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 

基  金:国家自然科学基金资助项目(31771908) 广东省科技攻关计划项目(2014A020208019,2013B020312002) 广州市科技计划项目(201903010015) 

主  题:蜡样芽孢杆菌 亚硝酸盐还原酶 基因克隆 异源表达 生物信息学分析 

摘      要:为研究蜡样芽孢杆菌LJ01(Bacillus cereus LJ01)中亚硝酸盐还原酶(NiR)的酶学性质,获得高表达量的基因工程菌,本文对B.cereus LJ01的NiR序列进行了生物信息学分析,并将NiR基因克隆到表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,构建了基因工程菌pET-28a(+)-nir-BL21和pET-32a(+)-nir-BL21,随后探究了不同诱导条件对重组NiR表达量的影响。结果表明NiR编码蛋白的理论分子量约为60 kDa,理论pI为5.47,二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,是不具有跨膜结构的亲水性蛋白。随着诱导温度的升高,重组NiR的表达量逐渐减少,诱导温度为16℃时重组NiR表达量最高。在同一诱导温度下,NiR在pET-28a(+)-nir-BL21中的表达量明显高于p ET-32a(+)-nirBL21,因此选用pET-28a(+)-nir-BL21作为基因工程菌。从B. cereus LJ01中克隆了NiR基因,构建了基因工程菌pET-28a(+)-nir-BL21,为该重组NiR的理化性质研究和食源芽孢杆菌中NiR的异源表达奠定了基础。

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